加強型RIPA裂解液       C1053+

貨號	產品名稱	規格	價格
C1053+-100	加強型RIPA裂解液	100ml	180元
C1053+-500	加強型RIPA裂解液	500ml	750元

 

描述： 加強型RIPA裂解液加強型對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分有較強裂解作用，是常用的細胞組織快速裂解液。使用加強型RIPA 裂解液特別適于提取膜蛋白以及western blot和大多數蛋白-蛋白相互作用的實驗等。

                                                     

儲存：4 ℃保存  12個月有效

 

制備細胞裂解產物

1.      800g 4℃離心5分鐘收集培養細胞，估計細胞離心后的體積（PCV, 10⁶ cells=~20 ml, 10⁷ cells =~100 ml PCV）；

2.      每50-100 ml PCV加入5倍體積RIPA裂解緩沖液（250-500 ml）,冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

3.      12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉移到新的離心管中，即得細胞總蛋白產物；

4.      假如所得蛋白產物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉移到新的離心管中，即得細胞總蛋白產物。

制備組織裂解產物

1.      取50-100 mg組織在冰上剪成碎片，用預冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；

2.      加入 0.5-1 ml 預冷 RIPA 裂解緩沖液；

3.      4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細胞被破碎，然后在冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

4.      12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉移到新的離心管中，即得組織總蛋白產物；

5.      假如所得蛋白產物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉移到新的離心管中，即得組織總蛋白產物；

6.      20％的甘油保存于 -70^oC 或-20^oC。

注意：

1.      在轉移上清液時不要吸入底部的沉淀物；

2.      在做免疫沉淀或免疫共沉淀時最好在實驗前進行蛋白的提取，以避免某些不穩定蛋白的降解；

3.      在該RIPA裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑。